目前已颁布的维生素测定系列标准中都增加了微孔板法，此方法在制作标准系列管、试样系列管，以及测定吸光度值时，简化了试验操作，相比之前传统的“试管法”，节省了大量的准备工作。相信不少检验员心里都暗暗窃喜，认为从此就可以从“试管中”解放出来了，但事实真的如大家所想吗？

也许未必！体系的缩小带来的是更多精准的要求，任何微小因素的影响都有可能导致试验失败。为此，北京陆桥特别推出国标维生素微孔板法即用型产品，为您避开影响因素，保证试验结果的准确性。下面就听小编仔细盘点影响该实验的几个重要因素：

一、标准溶液的浓度配制不准确，导致失败

01 天平精度不达要求，导致称量不准确

标准品应采用高精度天平称量。在叶酸、生物素和泛酸标准中，均规定使用精确至0.1mg（即0.0001g）的天平进行标准品的称量；而维生素B12则更需使用精确至0.01mg（即0.00001g）的天平进行标准品的称量，以此才能达到精确称量的目的。

02 溶解和转移操作中标准品的损失

很多实验员在用容器溶解标准品并转移到容量瓶的过程中，有溶解不充分、溢洒及转移不完全的情况，这会导致标准品损失，标准溶液浓度降低。 

03容量瓶定容不准确

标准溶液配制过程中需多次定容，每次定容都需谨慎对待，一旦哪个步骤定容不准确，就会引发连锁问题。定容后混匀不充分，容量瓶上下颠倒时发生漏液情况，或者从高浓度配置低浓度时，吸取量不准确，都会导致配制的标准溶液浓度不准确，进而导致测定结果偏高或偏低。

微孔板法即用型试剂盒中标准溶液配制VS传统标准溶液配制

国标微孔板法即用型试剂盒中，提供了定量冻干标准品。其标准溶液和标准工作液的配置，只需使用试剂盒中的无菌水充分溶解标准品冻干试剂即可，十分简便。因规避了上述国标方法中标准溶液配制过程中的诸多不准确因素，保证了标准溶液浓度的准确性。并且标准系列管每个标准点浓度均与国标要求的浓度一致，标准品同时提供来源说明，可以溯源，保证大家放心使用。

二、 菌株活性不稳定，导致失败

01菌株活化及保存不易

四项维生素试验所需标准菌株（ATCC7469、ATCC7830、ATCC8014）均需严格按照菌株说明书进行复苏活化。菌株活化之后，若想长期保存，最好采用超低温冷冻保存法（需要有超低温冰箱）进行保存，才能保证其活力。

02菌株使用不易

标准菌株活化及复苏后，不能马上进行试验，至少需使用相应培养基连续传种2-3代以上，才可以进行维生素检测试验。否则易出现标准系列管和试样管不生长或生长不好的情况。

03菌株活力判断不易

标准菌株在乳酸杆菌平板或乳酸杆菌肉汤中生长良好，肉眼看平板上菌落较大或肉汤中菌液浑浊，但并不等于该菌活力（对特定维生素利用敏感）良好。例如，经常有标准系列管吸光度值（即OD值）虽成梯度但整体数值较低的情况。而造成这种情况的原因就是该菌对特定维生素利用不够敏感，需重新从储备菌株复苏并传代，再次进行维生素测定试验以验证菌株的活力。

微孔板法即用型试剂盒中冻干菌球VS国标自制接种液

国标微孔板法即用型试剂盒中，提供了冻干定量菌球。该菌球真空包装，菌浓度定量制备，且可以保证菌株的活力，直接加入培养基中即可使用。相比国标自制接种液，则需要活菌、保菌、提前制备种子液，洗菌、调菌浓度等繁琐操作，在方便简单的同时，极大的提高了试验的成功率！同时，我司还提供了标准菌株的来源说明，可存档溯源。

三、 培养基影响，导致失败

维生素测定培养基制备时也有很多注意事项：

第一、要求从称量勺到配制培养基用的三角瓶，都需经过盐酸浸泡并至少200℃高温处理2h，去除维生素残留干扰，才可以使用，并且最好每个项目专用一套器材。坚决不可与实验室日常检测用器皿混用，避免混入待测维生素。

第二、培养基配制用水至少需达到二级水标准，才可以使用。

第三、高压灭菌121℃，5min，灭菌后及时取出冷却，避免褐变。

微孔板法即用型试剂盒中即用培养基VS灭菌培养基

国标微孔板法即用型试剂盒中，提供了即用型无菌液体培养基基础和冻干添加剂。将培养基中敏感不稳定成分进行冻干保存，可以进一步确保培养基的性能，使用前将添加剂溶解后与基础培养基混匀，就可直接使用。一步操作，简单方便。

四、 耗材干扰，导致失败

在过去几年的维生素实验中，我们经常遇到菌生长不好、测定结果低、回收率低等情况，分析各种原因时猛然发现：原来一次性耗材也是影响成败的一环。因为市售很多耗材含有影响测定菌株生长的物质，从而导致各种问题出现。此外，维生素微孔板法试验所使用的微孔板必须满足以下五点才能保证好的实验结果：

1）无菌

2）无维生素污染

3）有无菌封口膜且膜能封住每一个孔，避免孔间不同梯度污染

4）孔深度要够（因为反应体系需300uL）

5）透度要高（透度影响酶标仪读数）

市面上满足无菌条件的96孔微孔板比较常见，但同时满足上述五点要求的不多，需要大家仔细甄别。推荐大家购买我公司精心挑选的微孔板，此微孔板不仅满足上述5点要求，并且经我们试验验证微孔板材质不含抑菌成分，维生素测定结果比较稳定。

陆桥牌维生素微孔板法试剂盒系列产品

以上是小编精心整理的关于维生素检测实验中的主要影响因素，也是相对比较难控制和把握的。北京陆桥提供的维生素微孔板法即用型试剂盒系列产品，在帮您避开容易导致试验失败因素的同时保障您快速获得合格的检测结果，让维生素检测变的简单！