乳制品是营养丰富、经济实惠的优质蛋白且极易遭受致病菌的污染,而沙门氏菌是乳品检测最普遍的项目,且沙门氏菌不分解蛋白质,被沙门氏菌污染的乳品常常不发生明显腐败,不易被发现,所以沙门氏菌的检测不能止步于选择性分离的步骤,应共同参考生化试验和血清学鉴定的结果来确定是否检出沙门氏菌。
首先了解一下沙门氏菌属的生化反应,如下图【参考《沙门菌属血清型诊断》朱超,许学斌编著】:
其中,伤寒沙门氏菌产酸不产气;亚利桑那菌可分解乳糖;猪霍乱、多数甲型副伤寒、仙台、马流产、鸡、贝塔及一些伤寒沙门菌血清型等不产硫化氢或仅产生少量硫化氢。
沙门氏菌属的种类繁多,抗原结构复杂,截止2007年1月WHOCC-Salm出版的WKLM表解第9版已包括2579个血清型。
沙门氏菌的生化和血清学鉴定试验的操作较繁琐,也有较多的操作点需要注意,否则检测结果容易出错,下面咱们一起来学习一下。
生化试验
1.三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验
根据GB4789.4-2016的表1中沙门氏菌属的典型菌落特征描述,从选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落(用接种针自菌落中心挑取),直接接种于三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基,同时用接种环挑取相同菌落划线营养琼脂平板进行纯化,36℃±1℃培养16h-24h,必要时可延长培养至48h。
1.1三糖铁试验
注意 三糖铁琼脂接种时先在斜面划线,再于底层穿刺,但高层穿刺时接种针不能穿到底部,接种太深,否则有些菌产生的硫化氢会布满试管底部,影响底层培养基颜色变化的观察。
建议接种后的三糖铁琼脂安瓿瓶用封口膜轻轻的覆盖在瓶口,防止培养过程中培养基失水干缩后氧气进入,底部的黄色被氧化变色,影响结果观察;再用接种针在封口膜上扎些小孔利于培养过程中氧气的供应。
1.2赖氨酸脱羧酶试验
原理:某些细菌在酸性厌氧环境,且有赖氨酸底物存在的情况下能诱导产生赖氨酸脱羧酶,使赖氨酸脱羧产生碱性物质尸胺,导致培养基变紫,但不产生赖氨酸脱羧酶的细菌只能代谢葡萄糖产酸培养基变黄。
注意 在进行赖氨酸脱羧酶试验时,注意要挑取同一个待检菌落同时接种氨基酸脱羧酶对照管和赖氨酸脱羧酶试验管各一支,接种后在对照管和试验管液面上方均需加无菌液体石蜡(一定要是无菌的)覆盖。
您是否疑问为什么非要加无菌的液体石蜡?
由于氨基酸脱羧的产物尸胺、腐胺等遇氧不稳定,所以需要加无菌液体石蜡覆盖隔绝空气,保持胺的稳定性,确保试验结果的真实性。
鼠伤寒沙门氏菌
ATCC 14028
1.3生化结果初步判断
根据三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验结果,参考GB4789.4-2016中表2来初步判断是否有可疑的沙门氏菌。
根据表2的描述,如果遇到①三糖铁琼脂的试验管底部变红;②整个三糖铁琼脂试管为黄色,并且赖氨酸脱羧酶试验为阴性的试验结果时,说明该菌株为非沙门氏菌,不需再做后续的生化试验。